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JF Perrin mise à jour 2003/2020
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L'IEF est conduite au sein d'un gel de polyacrylamide de faible concentration qui n'exerce pas d'effet de tamisage moléculaire. Presque tout le monde travaille avec des gels qui proposent un gradient de pH préformé immobilisé (gels dits IPG, Immobilized pH Gradient). Ces gels sont présentés au paragraphe 2, voir sommaire à gauche. Très souvent les IEF sont la première étape vers une électrophorèse 2D, les gels sont donc des gels en monopiste et se présentent sous forme de bandes, de lanières (strip en annglais). Voir à ce sujet le paragraphe 4, menu de gauche.
On peut évidemment pratiquer des IEF en mode capillaire. Le paragraphe 3, menu de gauche, explique comment les gradients sont obtenus. On travaille soit en mode liquide simple en réalisant le gradient avec des ampholytes et en utilisant des capillaires à surface traitée pour éliminer l'électroendosmose. Soit avec des capillaires greffés pour proposer des gradients immobilisés. Un point intéressant en mode capillaire est celui de la lecture du résultat de focalisation : il faut, après focalisation au sein du gradient de pH, déplacer l'ensemble, sans le perturber, vers une fenêtre de lecture. Différentes méthodes existent, la plus simple consiste à modifier le tampon du compartiment alcalin du pôle négatif pour le passer en milieu acide. Si ce sujet vous intéresse, cher lecteur, je vous renvoie à la lecture du paragraphe 3, menu de gauche puis alors à la lecture de PRINCIPLES AND APPLICATIONS OF CAPILLARY ISOELECTRIC FOCUSING by Theresa Kristl, Hanno Stutz, Christian Wenz and Gerard Rozing ; ouvrage de la société Agilent Technologies ; 2014 ; disponible en ligne à : https://www.agilent.com/cs/library/primers/Public/5991-1660EN.pdf